RESUMO Introdução: A detecção de anticorpos contra o ácido desoxirribonucleico (DNA) nativo (ds) é um dos critérios de classificação para o diagnóstico do lúpus eritematoso sistêmico (LES). Objetivo: Descrever uma técnica imunoenzimática enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) quantitativa para a detecção de anticorpos imunoglobulina da classe G (IgG) anti-DNAds. Métodos: O desempenho da técnica ELISA foi avaliado utilizando o teste de imunofluorescência indireta com Crithidia luciliae (CLIFT) como referência. Anticorpos IgG anti-DNAds foram pesquisados por ELISA e CLIFT em amostras de soros de 127 pacientes com LES, 56 pacientes com outras doenças e 37 indivíduos sadios. O teste Q de Cochran foi utilizado para comparar as sensibilidades e as especificidades das reações, considerando diferenças significantes entre os testes quando p ≤ 0,05. Resultados: A técnica ELISA apresentou sensibilidade de 92,9% e especificidade de 94,6%, enquanto a sensibilidade e a especificidade da técnica CLIFT foram de 85,8% e 100%, respectivamente. A técnica ELISA apresentou sensibilidade significativamente maior do que a obtida com a técnica CLIFT (p = 0,0027); esta apresentou especificidade significativamente maior do que a obtida com a técnica ELISA (p = 0,0253). Conclusão: A técnica ELISA apresentou excelentes resultados em termos de sensibilidade e especificidade, podendo ser útil em pesquisa e rotina diagnóstica.

ABSTRACT Introduction: The detection of anti-double-stranded (ds) deoxyribonucleic acid (DNA) antibodies is one of the classification criteria for diagnosing systemic lupus erythematosus (SLE). Objective: To describe a quantitative enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting anti-dsDNA immunoglobulin class G (IgG) antibodies. Methods: The performance of ELISA was evaluated using the Crithidia luciliae indirect immunofluorescence test (CLIFT) as a reference. Anti-dsDNA IgG antibodies were screened by ELISA and CLIFT in serum samples from 127 patients with SLE, 56 patients with other diseases and 37 healthy persons. The Cochran Q test was used to compare the sensitivity and specificity of the reactions, with differences among the results being considered significant when p ≤ 0.05. Results: ELISA had a sensitivity of 92.9% and a specificity of 94.6%, whereas the sensitivity and specificity of CLIFT were 85.8% and 100%, respectively. ELISA was significantly more sensitive than CLIFT (p = 0.0027), whereas CLIFT was significantly more specific than ELISA (p = 0.0253). Conclusion: ELISA showed excellent results in terms of sensitivity and specificity, with a potential use in research and routine diagnostics.

RESUMEN Introducción: La detección de anticuerpos contra el ácido desoxirribonucleico (ADN) de doble cadena (dc) es uno de los criterios de clasificación para el diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). Objetivo: Describir una técnica inmunoenzimática (ELISA) cuantitativa para detección de anticuerpos de inmunoglobulina de clase G (IgG) anti-ADNdc. Métodos: Se evaluó el desempeño de la técnica ELISA mediante el test inmunofluorescencia indirecta con Crithidia luciliae (IFI-CL) como referencia. Anticuerpos IgG anti-ADNdc fueron analizados por ELISA y IFI-CL en muestras de sueros de 127 pacientes con LES, 56 pacientes con otras enfermedades y 37 personas sanas. La prueba Q de Cochran fue utilizada para comparar la sensibilidad y la especificidad de las reacciones considerando diferencias significantes entre los tests cuando p ≤ 0,05. Resultados: La técnica ELISA mostró sensibilidad del 92,9% y especificidad del 94,6%, mientras la sensibilidad y la especificidad de la técnica IFI-CL fueron del 85,8% y 100%, respectivamente. La técnica ELISA mostró sensibilidad significativamente mayor que la obtenida con IFI-CL (p = 0,0027); esta mostró especificidad significativamente mayor que la obtenida con ELISA (p = 0,0253). Conclusión: La técnica ELISA presentó resultados excelentes de sensibilidad y especificidad, con el potencial de ser utilizada en investigación y rutina diagnóstica.

RESUMO A toxoplasmose cerebral pode ser altamente debilitante e ocasionalmente fatal em pessoas com deficiências do sistema imune. Nesse estudo, nós avaliamos a resposta de anticorpos das subclasses da IgG para o Toxoplasma gondii em 19 amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com toxoplasmose cerebral que apresentavam uma reação IgG anti-T. gondii positiva com ELISA padronizada com uma preparação antigênica de cistos. Não foram encontradas diferenças significativas entre as taxas de positividade e as concentrações de anticorpos (média aritmética das absorbâncias das reações ELISA, MEA) para IgG1 e IgG2, mas as taxas de positividade e valores MEA para estas duas subclasses de IgG foram significativamente superiores aos da IgG3 e IgG4. A resposta marcante de anticorpos IgG2 em LCR de pacientes com toxoplasmose cerebral merece investigação adicional.

SUMMARY Cerebral toxoplasmosis can be highly debilitating and occasionally fatal in persons with immune system deficiencies. In this study, we evaluated the Toxoplasma gondii-specific IgG subclass antibody response in 19 cerebrospinal fluid (CSF) samples from patients with cerebral toxoplasmosis who had a positive IgG anti-T. gondii ELISA standardized with a cyst antigen preparation. There were no significant differences between the rates of positivity and the antibody concentrations (arithmetic means of the ELISA absorbances, MEA) for IgG1 and IgG2, but the rates of positivity and MEA values for these two IgG subclasses were significantly higher than those for IgG3 and IgG4. The marked IgG2 response in CSF from patients with cerebral toxoplasmosis merits further investigation.

Testes diagnósticos simples e rápidos baseados na aglutinação de partículas de látex têm sido utilizados para a pequisa de antígenos ou anticorpos específicos em muitas doenças. No presente trabalho, é descrito um teste de aglutinação em lâmina para a pesquisa de anticorpos contra cisticercos de Taenia solium, utilizando partículas de látex revestidas com um extrato bruto do parasita. Anticorpos anti-cisticercos foram pesquisados em 19 amostras de LCR de pacientes com neurocisticercose e em 24 amostras de LCR de pacientes com outros problemas neurológicos (neurosífilis, n = 8; neurotoxoplasmose, n = 3; meningite viral, n = 4; cefaléia crônica, n = 9). O teste de aglutinação apresentou sensibilidade e especificidade de 89,5% e 75%, respectivamente. O teste de aglutinação para cisticercose idealizado é simples, rápido e barato. Essas características tornam o teste um meio promissor de expansão e simplificação do imunodiagnósico da neurocisticercose. Estudos futuros poderiam testar a sensibilização das partículas de látex com antígenos de cisticercos purificados e a pesquisa de anticorpos em amostras de soros.

Simple and rapid latex-based diagnostic tests have been used for detecting specific antigens or antibodies in several diseases. In this article, we present the preliminary results obtained with a latex agglutination test (LAT) for diagnosing neurocysticercosis by detection of antibodies in CSF. A total of 43 CSF samples were assayed by the LAT: 19 CSF samples from patients with neurocysticercosis and 24 CSF samples from patients with other neurologic disorders (neurosyphilis, n = 8; neurotoxoplasmosis, n = 3; viral meningitis, n = 4, chronic headache, n = 9). The LAT exhibited 89.5% sensitivity and 75% specificity. The use of LAT seems to be an additional approach for the screening of neurocysticercosis with advantage of simplicity and rapidity. Further studies could be performed using purified antigens and serum samples.

No presente trabalho, são descritos os resultados da detecção de anticorpos específicos da classe IgA e da determinação da avidez dos anticorpos IgG em amostras sequenciais de soro de um paciente apresentando níveis significativos de anticorpos IgM anti-Toxoplasma gondii durante sete anos após o início das manifestações clínicas da infecção. Os anticorpos IgM foram detectados pelo teste de imunofluorescência indireta (IFI) e por três técnicas imunoenzimáticas (ELISA) comerciais. Os anticorpos IgA foram quantificados por uma técnica de ELISA de captura, utilizando um "kit" comercial. De acôrdo com as instruções do fabricante do "kit" utilizado para a pesquisa de IgA, a maioria dos pacientes com toxoplasmose aguda apresenta níveis de anticorpos > 40 unidades arbitrárias por ml (UA/mL). Utilizando este parâmetro, o paciente, ainda, apresentou um resultado de ELISA positivo (45 UA/mL) em uma amostra de soro coletada um ano após o início das manifestações clínicas. A avidez dos anticorpos IgG foi determinada com uma técnica de ELISA, utilizando o sistema "Falcon assay screening test" (F.A.S.T.®-ELISA). Índices de avidez compatíveis com uma infecção recente foram encontrados nas amostras de soros obtidas durante os primeiros 5 meses após o início dos sintomas clínicos da toxoplasmose. Os nossos dados mostram que a interpretação de resultados IgM positivos, como indicativos de toxoplasmose aguda, requer confirmação laboratorial com outros testes ou demonstração de um aumento significativo dos títulos de anticorpos em amostras sequenciais de soros.

We report the detection of specific IgA antibodies and the determination of IgG avidity in sequential serum samples from a patient exhibiting significant levels of Toxoplasma-specific IgM antibodies for seven years after the onset of the clinical symptoms of toxoplasmosis. IgM antibodies were detected by an indirect immunofluorescence test and by three commercial enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). Anti-T. gondii IgA was quantified by the <FONT FACE="Symbol">a</FONT>-capture ELISA technique using a commercial kit. As defined by the manufacturer of the IgA ELISA test used, most patients with acute toxoplasmosis have antibody levels > 40 arbitrary units per ml (AU/mL). At this cut-off level, the patient still had a positive ELISA result (45 AU/mL) in a serum sample taken one year after the beginning of clinical manifestations. The IgG avidity-ELISA test was performed with the Falcon assay screening test (F.A.S.T.®) - ELISA system. Avidity indices compatible with a recent Toxoplasma infection were found only in serum samples taken during the first 5 months after the onset of the clinical symptoms of toxoplasmosis. These results show that the interpretation of positive IgM results as indicative of recently acquired toxoplasmosis requires additional laboratory confirmation either by other tests or by the demonstration of a significant rise in the antibody titers in sequential serum samples.